1. 擴增曲線不光滑或波動

表現(xiàn)：曲線呈鋸齒狀或背景信號不均。

可能原因：

· 模板濃度過低導(dǎo)致信號弱，經(jīng)系統(tǒng)矯正后波動。

· 儀器檢測孔異?；螂妷?光源不穩(wěn)定。

解決方案：

· 提高模板濃度重復(fù)實驗。

· 檢查儀器穩(wěn)定性，必要時校準光學(xué)模塊。

2. 擴增曲線斷裂或下滑

表現(xiàn)：曲線在指數(shù)期突然下降。

可能原因：

模板濃度過高，基線期內(nèi)提前起峰，儀器誤判基線。

反應(yīng)管中存在氣泡，溫度升高后破裂導(dǎo)致信號驟降。

解決方案：

調(diào)整基線終點范圍（如從3-15循環(huán)改為3-10循環(huán)）重新分析。

加樣時避免氣泡，離心去除殘留氣泡。

3. 擴增曲線呈鋸齒狀且不連續(xù)

表現(xiàn)：曲線雜亂，重復(fù)性差。

可能原因：ROX熒光校正染料添加不當或濃度不均。

解決方案：

確認ROX添加步驟和濃度是否正確。

嘗試去掉ROX分析數(shù)據(jù)，觀察重復(fù)性是否改善。

4. 無擴增曲線或Ct值過大

表現(xiàn)：信號弱或無信號，Ct值超過3524。

可能原因：

熱啟動酶未充分激活或模板降解。

引物降解或特異性喪失。

解決方案：

延長預(yù)變性時間至10分鐘激活酶。

檢查引物完整性（電泳檢測），避免反復(fù)凍融。

5. 其他硬件或操作問題

耗材影響：低質(zhì)量耗材可能導(dǎo)致透光性差或封膜變形，引發(fā)信號異常。

儀器校準：定期校準溫度模塊和光學(xué)系統(tǒng)，確保信號采集穩(wěn)定。

程序設(shè)置：檢查循環(huán)數(shù)是否充足（建議40循環(huán)），確認信號采集步驟無遺漏。

總結(jié)建議

若問題持續(xù)，建議：

1. 備份數(shù)據(jù)后重裝軟件并恢復(fù)校準文件。

2. 聯(lián)系工程師檢查硬件（如溫度傳感器、加熱塊）。

3. 使用標準品驗證儀器性能，排除試劑或操作因素。